重組蛋白表達(dá)實驗中，即便是完全按照自己設(shè)計的程序來操作，也可能會出現(xiàn)各種各樣的問題，只要這些問題出現(xiàn)，基本上就代表我們的實驗沒成功。其實，實驗做多了之后，這種問題可以說是非常的普遍。有鑒于此，普健生物就和大家總結(jié)一下有關(guān)重組蛋白表達(dá)過程中常見的一些表達(dá)異常的情況及其解決辦法。

　　1、密碼子位移。外源基因序列內(nèi)部核糖體結(jié)合位點出現(xiàn)偏移，或者受到一些其他因素干擾，導(dǎo)致密碼子出現(xiàn)位移的情況;

　　2、稀有子密碼問題。我們可以使用相關(guān)軟件對稀有子密碼進(jìn)行分析，在進(jìn)行重組表達(dá)之前，對蛋白序列進(jìn)行優(yōu)化。我們紙袋，在蛋白表達(dá)起始位點前的15個氨基酸密碼子至關(guān)重要，連續(xù)的兩個稀有子密碼可能會造成表達(dá)效率降低的情況。所以，我們可以通過對其進(jìn)行優(yōu)化，避免如上可能會出現(xiàn)的問題后再進(jìn)行表達(dá);

　　3、信號肽表達(dá)問題。一般來說，大腸桿菌缺乏加工蛋白信號肽的機制，所以，我們在進(jìn)行相關(guān)真核表達(dá)時候，需要引起額外的注意;

　　4、GC含量高問題。一般來說，基因序列中GC含量超過70%的時候，就很難進(jìn)行蛋白表達(dá)了，想要表達(dá)成功，我們只能進(jìn)行相關(guān)優(yōu)化工作，降低其中GC含量后再表達(dá);

　　5、蛋白大小異常問題。小于10KD或者大于100KD的蛋白都難以表達(dá)，如果遇到這種蛋白，可考慮使用其他辦法;

　　6、蛋白標(biāo)簽選擇問題。通常我們需要在蛋白表達(dá)中加入各種標(biāo)簽，可一些標(biāo)簽會影響蛋白表達(dá)，甚至造成蛋白表達(dá)不成功。這個時候，我們就需要考慮采用一些易于表達(dá)的標(biāo)簽，不要選擇難以表達(dá)的標(biāo)簽;

　　在重組蛋白表達(dá)的過程中，我們常常會遇到這樣或者那樣的問題，一般來說，我們只需要根據(jù)實驗的要求來進(jìn)行，都不會出現(xiàn)什么問題。牢記如上的六點，在表達(dá)過程中多注意相關(guān)情況，相信蛋白表達(dá)失敗的概率不會太高。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。