之前我們和大家聊過有關(guān)重組蛋白表達(dá)因為設(shè)計問題而導(dǎo)致的表達(dá)異常情況，可以說，它是蛋白表達(dá)失敗很重要的一個原因。今天，我們再和大家聊聊有關(guān)因為操作方面失誤而導(dǎo)致的相關(guān)問題，希望對大家的實驗有所幫助。

　　其實，重組蛋白表達(dá)失誤的情況并不少見，只要注意如下幾點，一般都不成問題。

　　1、質(zhì)粒構(gòu)建問題。當(dāng)我們在完成質(zhì)粒構(gòu)建后，除了普通的酶切鑒定和PCR鑒定外，還需要進(jìn)行質(zhì)粒的測序工作，只有在確保無任何突變的情況下，我們才能對其進(jìn)行下一步實驗。當(dāng)然了，出現(xiàn)序列缺失或多余的情況就更不能進(jìn)行實驗了;

　　2、宿主菌確定。在進(jìn)行表達(dá)之前，我們需要確定宿主菌是正確可用的，如果有問題，則會直接造成表達(dá)失敗;

　　3、蛋白降解問題。一般來說，宿主菌內(nèi)存在很多蛋白酶，它會造成蛋白的降解。所以，很多情況下，并不是蛋白沒有表達(dá)，而是表達(dá)出來后又被降解了，這樣，也很難讓我們檢測到蛋白的存在。一般這個時候，我們需要加入一些藥劑來抑制蛋白酶的產(chǎn)生;

　　4、培養(yǎng)基問題。選錯培養(yǎng)基，或者選擇的培養(yǎng)基營養(yǎng)液錯誤，也可能會造成表達(dá)失敗(選擇合適的培養(yǎng)基即可);

　　5、分子異常情況。蛋白的分子量或大小等相關(guān)因素與預(yù)期偏差較大，這個可以說是因為設(shè)計或者中間過程出現(xiàn)了偏差導(dǎo)致，我們需要進(jìn)行相關(guān)分析后再次進(jìn)行表達(dá);

　　總的來說，因為操作錯誤導(dǎo)致蛋白表達(dá)異常的情況還是比較多的，這就要求我們在日常實驗中多注重細(xì)節(jié)問題，只有做好了這些方面的工作，才能保證重組蛋白的高效表達(dá)。當(dāng)然了，影響蛋白表達(dá)的因素還有很多，這就需要我們做好各類檢測工作，只有達(dá)到了相應(yīng)的需求后，才能進(jìn)一步保障實驗的成功率。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。