劃重點：
•雜交瘤技術(shù)是獲得單克隆抗體最常用的技術(shù)。
•雜交瘤技術(shù)變體包括B細胞和立體特異性靶向協(xié)議。
•噬菌體展示技術(shù)和單B細胞技術(shù)是雜交瘤技術(shù)的替代方案。

單克隆抗體(mab)是一種通用的高度特異性結(jié)合蛋白，長期以來被認為是對抗疾病的“魔彈”，也是診斷和研究等其他生物學(xué)用途的重要工具。這些應(yīng)用只有在允許分離單個抗體的方法出現(xiàn)后才有可能。雜交瘤技術(shù)是這方面的先驅(qū)。事實上，這項技術(shù)徹底改變了治療和研究領(lǐng)域，1984年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎進一步認可了這一點。那么雜交瘤技術(shù)隨著時間的推移發(fā)展，與其他方法相比，雜交瘤技術(shù)又有哪些優(yōu)勢和局限性呢？

雜交瘤技術(shù)由Georges Köhler和Cesar Milstein于1975年基于用所需抗原免疫動物，然后將特異性B淋巴細胞與“不朽”骨髓瘤細胞融合，然后被克隆以獲得穩(wěn)定的單克隆細胞系，在選擇感興趣的抗體分泌克隆后，將細胞轉(zhuǎn)移到大規(guī)模培養(yǎng)裝置中，以產(chǎn)生所需數(shù)量的抗體。

自引入雜交瘤技術(shù)以來，單克隆抗體對醫(yī)學(xué)產(chǎn)生了深遠的影響，提供了幾乎更多的診斷和研究試劑來源。鑒于單克隆抗體的通用性和實用性，雜交瘤技術(shù)帶來了許多發(fā)現(xiàn)，允許產(chǎn)生針對抗原的抗體，甚至針對同一抗原的不同抗體。但雜交瘤技術(shù)也有其局限性，因此，科學(xué)家們在雜交瘤技術(shù)的基礎(chǔ)上，還發(fā)現(xiàn)了噬菌體展示技術(shù)和單B細胞技術(shù)。

雜交瘤技術(shù)
優(yōu)點：
保留了可變區(qū)和恒定區(qū)基因組合的原生配對。
抗體嵌合和人源化方法以及轉(zhuǎn)基因動物可用于獲得用于人類治療的單克隆抗體。
抗體在體內(nèi)親和成熟。
缺點：
需要已知和可用的抗原靶點。
細胞融合和雜交瘤分離效率低。
細胞系的產(chǎn)生和特異性雜交瘤的選擇需要相對較長的時間。
雜交瘤細胞系可能在遺傳上不穩(wěn)定。
細胞培養(yǎng)物污染的持續(xù)風(fēng)險。

噬菌體展示技術(shù)
優(yōu)點：
不需要動物宿主。
大量克隆的篩選增加了產(chǎn)生良好單克隆抗體的機會。
分離抗毒性和非免疫原性抗原的單克隆抗體的潛力。
重新設(shè)計天然cdr以產(chǎn)生特異性和親和力更高的單克隆抗體的可能性。
龐大的展示文庫數(shù)據(jù)來源。
缺點：
噬菌體文庫的多樣性取決于細菌轉(zhuǎn)化效率。
抗體格式僅限于scFv和Fab。
建立噬菌體展示文庫成本高昂。

單個B細胞技術(shù)
優(yōu)點：
與雜交瘤技術(shù)相比，獲得特異性單克隆抗體的效率更高。
從接種疫苗或自然免疫的人類受試者中分離單克隆抗體的可能性。
原生單克隆抗體的分離，并保留天然同源VH和VL配對。
不需要B細胞培養(yǎng)過程。
具有分離抗體外難以模擬的構(gòu)象決定簇的功能性單克隆抗體的潛力。
可以區(qū)分處于不同發(fā)育和分化階段的B細胞。
在實驗研究中，B細胞可以從多個樣本中分離出來，而不需要對動物實施安樂死。
抗體在體內(nèi)經(jīng)歷親和成熟。
缺點：
單細胞分選設(shè)備價格昂貴。
RT-PCR程序可能具有挑戰(zhàn)性。
針對B細胞標記物的抗體并非適用于所有物種。