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成果見刊(IF12)|新冠病毒免疫原性表位和抗體篩選的新方法

發(fā)表時間:2022-03-09 訪問次數(shù):1809

  2021年06月19日蘇州系統(tǒng)醫(yī)學研究所程根宏課題組和普健生物(武漢)科技有限公司、十堰市太和醫(yī)院以及蘇州方科生物有限公司合作在Small Methods雜志在線發(fā)表了《Methods to Identify Immunogenic Peptides in SARS-CoV-2 Spike and Protective Monoclonal Antibodies in COVID-19 Patients》研究成果。該論文發(fā)現(xiàn)了一種COV2病毒免疫原性表位和抗體篩選的新方法。

  中和抗體通過與COV2病毒的S蛋白結(jié)合,可以有效阻止COV2病毒感染細胞。它們既可以用于治療感染COV2病毒的患者,也能夠作為預防性療法,給易感高危人群提供被動免疫能力。目前雖然已有SARS-CoV-2的中和抗體被開發(fā)為治療藥物,但對于能診斷COV2病毒以及產(chǎn)生中和抗體的免疫原性表位尚未清楚。

  該研究團隊首先構建表達含25個氨基酸的多肽噬菌體文庫,這些多肽覆蓋COV2病毒Spike全長蛋白,將該噬菌體文庫與7名COV2患者和一個具有與其同源性表位結(jié)合抗體健康個體的血清混合,再通過Protein A/G磁珠富集與抗體結(jié)合的噬菌體文庫,進行PCR擴增及測序。最終分析得到3個位于RBM區(qū)的S430-451,S470-481和S501-515特異性較好的表位。

  通過對不同患者血清中的抗體分布情況以及抗體水平與臨床狀態(tài)的關系研究后,發(fā)現(xiàn)對于COVID-19的中和活性可能是由于針對多種表位的抗體組合而成的。再用這3種多肽分別免疫小鼠刺激產(chǎn)生相應抗體后檢測發(fā)現(xiàn),其中S470-486具有較高的免疫原性,產(chǎn)生的中和抗體能抑制COV2病毒的感染。

  為進一步證明S470-486肽上的抗原表位是否能識別COV2病毒感染患者體內(nèi)的中和抗體,從15個COV2患者PBMC中得到抗體的VH和VL,構建出了 ScFv抗體表達噬菌體文庫,以生物素標記的S470-486多肽為誘餌經(jīng)過3輪淘選富集,從庫容量為8.7x109的ScFv文庫中得到了兩株單克隆抗體(R3P1-F8和R3P2-A9-3),再將其構建到含有人IgG1主鏈的表達載體上。

  最后通過ELISA分析證實了全長的R3P1-F8和R3P2-A9-3與S470-486多肽的結(jié)合能力。

  其中R3P2-A9-3能有效地阻斷SARS-CoV-2假病毒和野生型病毒的感染。

  該研究不僅發(fā)現(xiàn)了新的COV2病毒抗原表位和中和抗體,也建立了一種有效的COV2病毒抗原表位和中和抗體篩選的方法。

  綜上所述,我們可以看到噬菌體展示技術顛覆了傳統(tǒng)的雜交瘤方法從而在短時間獲得全人重組抗體,為全人重組抗體提供了一條簡便、快捷的基因工程抗體制備路線,是全人重組抗體制備發(fā)展史上重要的轉(zhuǎn)折點,未來在抗體藥物的研發(fā)和生產(chǎn)中會愈發(fā)地受到重視。當然,關于該方法的篩選效率、安全性和臨床應用的潛力還要更多的研究去驗證。

  本項研究工作中噬菌體文庫的構建、淘選、重組抗體表達純化均由普健生物完成。普健生物具有千億級全人重組抗體庫和近千億級天然納米抗體庫,可以為您提供最專業(yè)的噬菌體展示技術服務。

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