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哺乳動(dòng)物蛋白表達(dá)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染之間有哪些不同?

發(fā)表時(shí)間:2023-10-25 訪問(wèn)次數(shù):704

  我們?cè)诶?strong>哺乳動(dòng)物表達(dá)蛋白時(shí),因?yàn)槠淠軌蚋玫拇偈沟鞍走M(jìn)行正確的折疊和修飾功能實(shí)現(xiàn),所得所得蛋白更加接近天然蛋白的狀態(tài),所以,利用其制備的藥品在效果方面更好。我們知道,在利用哺乳動(dòng)物蛋白表達(dá)系統(tǒng)時(shí),常常會(huì)通過(guò)兩種方式:瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。那么,這兩種方法有哪些方面的不同呢?

  瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染之間有哪些不同?

  其實(shí)就操作而言,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染大體相同,都是將目的蛋白轉(zhuǎn)染到哺乳動(dòng)物體內(nèi),利用其蛋白表達(dá)過(guò)程表達(dá)目的蛋白。但是,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染并沒(méi)有將目的蛋白轉(zhuǎn)染到細(xì)胞染色體上,而是轉(zhuǎn)染至游離的載體上,這樣能夠讓我們?cè)诙虝r(shí)間內(nèi)獲得大量目的蛋白。這個(gè)方法只能短時(shí)間內(nèi)獲得蛋白,但是隨著細(xì)胞的繁殖,會(huì)導(dǎo)致外源基因的丟失,最終無(wú)法生產(chǎn)目的蛋白;

  而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染則是將目的蛋白轉(zhuǎn)染到細(xì)胞染色體上,而后隨著原細(xì)胞蛋白的表達(dá)而表達(dá)。這個(gè)方法不會(huì)造成目的基因的丟失,能夠長(zhǎng)期穩(wěn)定地進(jìn)行目的蛋白表達(dá);

  瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染在操作上存在哪些方面的不同?

  1、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染選擇的質(zhì)粒不需要有抗性,而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染所需質(zhì)粒需要有一定的抗性來(lái)進(jìn)行后期的克隆株篩選;

  2、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的操作相對(duì)簡(jiǎn)單,只要在質(zhì)粒構(gòu)建好后,通過(guò)細(xì)胞復(fù)蘇、轉(zhuǎn)染、培養(yǎng)、蛋白純化等一系列的操作后即可獲得目的蛋白。而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染則需要構(gòu)建好質(zhì)粒線性化,導(dǎo)入細(xì)胞,而后將轉(zhuǎn)染后的質(zhì)粒與細(xì)胞進(jìn)行融合,再通過(guò)篩選、培養(yǎng)等一系列的步驟后再構(gòu)建相應(yīng)的穩(wěn)定細(xì)胞系(穩(wěn)定轉(zhuǎn)染可以實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期穩(wěn)定地生產(chǎn)蛋白);

  總的來(lái)說(shuō),我們?cè)谶M(jìn)行哺乳動(dòng)物蛋白表達(dá)時(shí),完全可以根據(jù)需求來(lái)進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,當(dāng)短期需要蛋白時(shí),選擇瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,長(zhǎng)期需要蛋白時(shí),選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。當(dāng)然了,具體選擇也需要結(jié)合相關(guān)成本和技術(shù)支持來(lái)選擇。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供哺乳動(dòng)物蛋白表達(dá)服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來(lái)電咨詢。

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